
ti质粒为什么叫?
Ti质粒是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA分子。
Ti质粒可能起源于具有自主复制功能的原始大分子,即Ti质粒起源于自主复制的RNA分子。核糖核酸多聚体具有自主复制的信息和能力。由于发现RNA分子具有催化化学反应的能力使得RNA为Ti质粒起源的学说变得更具有吸引力。
延伸阅读
ti质粒上的tdna特点?
根癌农杆菌的Ti质粒上有一段转移DNA(T-DNA),具有向植物细胞传递外源基因的能力,而细菌本身并不进入受体细胞。
农杆菌侵染植物后,Ti 质粒中的 T-DNA 区段脱离质粒而整合到受体植物的染色体上。因此,如果把外源基因插入 T-DNA 中,就有可能携带进入受体植物并整合到染色体上。
T-DNA又名三螺旋DNA,是一种由三股ssDNA旋转螺旋形成的一种特殊脱氧核糖核苷酸结构。
T-DNA是Ti质粒上的一个片断
ti质粒怎么导入农杆菌?
转化:目的基因插入Ti质粒的T-DNA上——进入农杆菌——导入植物细胞——目的基因整合到植物染色体的DNA上——目的基因得以稳定维持和表达
1、获取目的基因:用限制性核酸内切酶切割下目的基因。
2、基因表达载体的构建:将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。
3、将目的基因导入受体细胞:将含目的基因的重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。
4、目的基因的检测与鉴定:用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定(这个方法需要导入重组后的细胞的植物体,详见第五步) 几种方法进行检验(根据要求选取不同方法)。
5、最后将成功表达的细胞导入植物体内,对植物体进行个体生物学水平鉴定。
整个转基因体系的建立步骤大致可以归纳为:目的载体的构建—载体的农杆菌转化—农杆菌与植株共培养—转化植株的筛选—转化植株的鉴定。
在每一步中都涉及到很多的方法与技术。目的载体的构建,包括目的基因的克隆、载体的酶切、连接(用限制性核酸内切酶与DNA连接酶),以及测序分析。载体的农杆菌转化,目前有很成熟的方法,试验中应注意热激和冷激的时间。农杆菌与植株的共培养,即为植株转化实验,在溶液中加入促进植株愈伤生长的激素能一定程度提高转化率。转化植株的筛选,大多是利用抗生素进行筛选的,抗生素的选择则需根据目的载体确定,设置不同梯度的抗生素对植株进行筛选。转化植株的鉴定,一般采用PCR法。以上所有的操作,都应该在无菌环境下进行,无菌是植物组培的一项基本,但是重要的要素。
农杆菌质粒载体是什么?
载体是农杆菌中特有的Ti-质粒,受体细胞是大多数的双子叶植物细胞和裸子植物细胞
农杆菌侵染植物首先是吸附于植物表面伤口,受伤植物分泌的酚类小分子化合物可以诱导Vir基因的表达。Vir产物能诱导Ti质粒产生一条新的T-DNA单链分子。此单链分子从Ti质粒上脱离后,可以与Vir产物VIRD 2 蛋白共价结合,并在VIRD 4和VIRB等蛋白的帮助下从农杆菌进入植物细胞的染色体中。
ti质粒存在于哪?
Ti质粒存在于根瘤土壤杆菌细胞中,一种核区DNA外的自主复制的环形双链DNA
ti质粒结构特点?
Ti质粒是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种核区DNA外的自主复制的环形双链DNA分子。是英文肿瘤诱发(tumor-inducing)的缩略式。
ti质粒作为质粒载体的优缺点?
:
(1)具有较小的分子量。经验表明,为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂,克隆载体的分子大小最好不要超过10Kb。
pBR322质粒这种小分子量的特点,不仅易于自身DNA的纯化,而且可容纳较大的外源DNA片段;
(2)具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号,能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。
标记基因往往可以赋予宿主细胞一种新的表型,这种转化细胞可明显地区别于非转化细胞。
当我们把一个DNA片段插入到某一个标记基因内时,该基因就失去了相应的功能。
当把这种重组DNA分子转到宿主细胞后,该基因原来赋予的表型也就消失了。
要是仍保留了原来表型的转化细胞,细胞内含有的DNA分子一定不是重组子。
很显然,既要指示外源DNA是否进入了宿主细胞,又要指示载体DNA分子中是否插入了外源DNA片段,那么这种载体必须至少具有两个标记基因。
另外,pBR322质粒载体还具较高的拷贝数,而且经过氯霉素扩增之后,每个细胞中可积累1000~3000个拷贝,这就为重组体DNA的制备提供了极大的方便。
用ti质粒作为运载体的原因?
一般载体所具备的基本条件为:
1、能自我复制,并具有一定的拷贝数;
2、带有抗性基因,便于筛选和鉴定;
3、在适当的位置有单酶切位点;
4、带有强启动子,驱动目的基因在宿主细胞内高效表达。
Ti质粒是诱导植物肿瘤的质粒,其结果中的可转移DNA(T-DNA)顺序有促进Ti质粒转移至植物细胞染色体DNA(cDNA)中的作用。T-DNA由20kb组成,可随机整合至植物细胞cDNA中。Ti质粒为环状双螺旋DNA,由185kb组成。
ti质粒有什么特点?
ti 质粒特点是可转移,并且可以携带目的基因与宿主生物的染色体基因整合。 ti 质粒是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种核区 DNA 外的自主复制的环形双链 DNA 分子。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核 DNA 之外,并具有自我复制能力的很小的双链环状 DNA 分子。
什么是ti质粒载体,其介导的植物转基因原理如何?
Ti是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA分子。
它控制根瘤的形成,可作为基因工程的载体。Ti是英文肿瘤诱发(tumor-inducing)的缩略式。Ti-DNA由细菌释放后然后进入植物细胞。然后整合进植物的染色体并支配这些细胞的功能。这种转移的确切机制仍不是很清楚。基因工程中用到的Ti-DNA主要就是作为载体侵入植物细胞,完成目的基因的导入,即是农杆菌转化法。
标签: [db:关键字]
本文地址:https://www.lifejia.cn/news/296369.html
免责声明:本站内容仅用于学习参考,信息和图片素材来源于互联网,如内容侵权与违规,请联系我们进行删除,我们将在三个工作日内处理。联系邮箱:cloudinto#qq.com(把#换成@)

 
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
 